Diagnosticul de laborator al aproape tuturor bolilor infecțioase se bazează pe depistarea anticorpilor în sângele pacientului, care sunt produși împotriva antigenilor agentului patogen, prin metodele reacțiilor serologice. Au intrat în practica medicală de la sfârșitul secolului al XIX-lea până la începutul secolului al XX-lea.
Dezvoltarea științei a ajutat la determinarea structurii antigenice a microbilor și a formulelor chimice ale toxinelor lor. Acest lucru a făcut posibilă crearea nu numai a serurilor terapeutice, ci și de diagnosticare. Ele sunt obținute prin administrarea de agenți patogeni atenuați la animalele de laborator. După câteva zile de expunere, sângele iepurilor sau șoarecilor este folosit pentru a pregăti preparate utilizate pentru identificarea microbilor sau a toxinelor acestora prin teste serologice.
Manifestarea externă a unei astfel de reacții depinde de condițiile stabilirii acesteia și de starea antigenelor din sângele pacientului. Dacă particulele microbiene sunt insolubile, ele precipită, lizează, se leagă sau se imobilizează în ser. Dacă antigenele sunt solubile, atunci apare fenomenul de neutralizare sau precipitare.
Reacția de aglutinare (RA)
Testul de aglutinare serologică este foarte specific. Este ușor de executat și destul de ușorvizuale, pentru a determina rapid prezența antigenelor în serul sanguin al pacientului. Este folosit pentru a testa reacția Vidal (diagnosticarea febrei tifoide și paratifoide) și Weigl (febra tifoidă).
Se bazează pe o interacțiune specifică între anticorpii umani (sau aglutinine) și celulele microbiene (aglutenogeni). După interacțiunea lor, se formează particule care precipită. Acesta este un semn pozitiv. Agenții microbieni vii sau uciși, ciupercile, protozoarele, celulele sanguine și celulele somatice pot fi utilizați pentru a stabili reacția.
Chimic, reacția este împărțită în doi pași:
- Conexiune specifică a anticorpilor (AT) cu antigenele (AG).
- Nespecific - precipitarea conglomeratelor AG-AT, adică formarea aglutinatului.
Reacție de aglutinare indirectă (IPHA)
Această reacție este mai sensibilă decât cea anterioară. Este folosit pentru a diagnostica boli cauzate de bacterii, paraziți intracelulari și protozoare. Este atât de specific încât pot fi detectate chiar și concentrații foarte mici de anticorpi.
Pentru producerea acestuia se folosesc eritrocitele de oaie purificate și globulele roșii umane pre-tratate cu anticorpi sau antigeni (în funcție de ceea ce dorește să găsească tehnicianul de laborator). În unele cazuri, globulele roșii umane sunt tratate cu imunoglobuline. Se consideră că au avut loc reacții serologice ale eritrocitelor dacă acestea s-au așezat pe fundul tubului. Despre o reacție pozitivăspuneți când celulele sunt dispuse sub forma unei umbrele inversate, ocupând întregul fund. O reacție negativă este numărată dacă eritrocitele s-au așezat într-o coloană sau sub forma unui buton în centrul fundului.
Reacție de precipitare (RP)
Reacțiile serologice de acest tip sunt folosite pentru a detecta particule extrem de mici de antigene. Acestea pot fi, de exemplu, proteine (sau părți ale acestora), compuși ai proteinelor cu lipide sau carbohidrați, părți de bacterii, toxinele acestora.
Serurile pentru reacție sunt obținute prin infectarea artificială a animalelor, de obicei iepuri. Prin această metodă, puteți obține absolut orice ser precipitant. Stabilirea reacțiilor de precipitare serologică este similară ca mecanism de acțiune cu reacțiile de aglutinare. Anticorpii conținuți în ser se combină cu antigenii într-o soluție coloidală, formând molecule mari de proteine care se depun pe fundul tubului sau pe substrat (gel). Această metodă este considerată foarte specifică și poate detecta chiar și cantități neglijabile de substanță.
Folosit pentru a diagnostica ciuma, tularemia, antraxul, meningita și alte boli. În plus, este implicat într-un examen medico-legal.
Reacție de precipitare a gelului
Reacțiile serologice pot fi efectuate nu numai în mediu lichid, ci și în gel de agar. Aceasta se numește metoda de precipitare difuză. Cu ajutorul acestuia se studiază compoziția amestecurilor antigenice complexe. Această metodă se bazează pe chemotaxia antigenelor față de anticorpi și invers. Într-un gel se mișcăunul spre celăl alt la viteze diferite și, întâlnindu-se, formează linii de precipitații. Fiecare linie este un set de AG-AT.
Reacție de neutralizare a exotoxinei cu antitoxină (PH)
Serurile antitoxice sunt capabile să neutralizeze acțiunea exotoxinei produse de microorganisme. Aceste reacții serologice se bazează pe aceasta. Microbiologia folosește această metodă pentru a titra serurile, toxinele și toxoidele și pentru a determina activitatea lor terapeutică. Puterea de neutralizare a toxinelor este determinată de unitățile convenționale - AE.
În plus, datorită acestei reacții, este posibil să se determine specia sau tipul de exotoxină. Acesta este utilizat în diagnosticul de tetanos, difterie, botulism. Studiul poate fi efectuat atât „pe sticlă”, cât și în gel.
Reacția de liză (RL)
Serul imunitar, care intră în organismul pacientului, are, pe lângă funcția sa principală de imunitate pasivă, și proprietăți de lizare. Este capabil să dizolve agenții microbieni, elementele străine celulare și virușii care intră în corpul pacientului. În funcție de specificul anticorpilor incluși în ser, se izolează bacteriolizinele, citolizinele, spirochetolizinele, hemolizinele și altele.
Acești anticorpi specifici sunt numiți „complement”. Se găsește în aproape toate fluidele corpului uman, are o structură proteică complexă și este extrem de sensibil la creșterea temperaturii, tremurături, acizi și lumina directă a soarelui. Dar în stare uscată este capabil să se reținăproprietățile sale de lizare până la șase luni.
Există aceste tipuri de reacții serologice de acest tip:
- bacterioliza;
- hemoliză.
Bacterioliza se realizează folosind serul sanguin al pacientului și serul imunitar specific cu microbi vii. Dacă în sânge este prezent suficient complement, atunci cercetătorul va vedea bacteriile lizând, iar reacția va fi considerată pozitivă.
A doua reacție serologică a sângelui este aceea că o suspensie de globule roșii ale pacientului este tratată cu ser care conține hemolisine, care sunt activate doar în prezența unui anumit compliment. Dacă există unul, atunci asistentul de laborator observă dizolvarea globulelor roșii. Această reacție este utilizată pe scară largă în medicina modernă pentru a determina titrul complementului (adică cea mai mică cantitate a acestuia care provoacă liza eritrocitelor) în serul sanguin și pentru a efectua o analiză pentru fixarea complementului. În acest fel se efectuează un test serologic pentru sifilis - reacția Wasserman.
Reacția de fixare a complementului (CFR)
Această reacție este utilizată pentru a detecta anticorpi la un agent infecțios din serul sanguin al pacientului, precum și pentru a identifica agentul patogen prin structura sa antigenică.
Până în acest moment, am descris reacții serologice simple. RSK este considerată o reacție complexă, deoarece nu două, ci trei elemente interacționează în ea: anticorp, antigen și complement. Esența sa constă în faptul că interacțiunea dintre anticorp și antigenapare numai în prezența proteinelor complementului, care sunt adsorbite pe suprafața complexului AG-AT format.
Antigenele în sine, după adăugarea complementului, suferă modificări semnificative, care arată calitatea reacției. Poate fi liză, hemoliză, imobilizare, acțiune bactericidă sau bacteriostatică.
Reacția în sine are loc în două faze:
- Formarea unui complex antigen-anticorp care nu este vizibil vizual pentru examinator.
- Schimbarea antigenului sub acțiunea complementului. Această fază poate fi urmărită cel mai adesea cu ochiul liber. Dacă reacția nu este vizibilă vizual, atunci se utilizează un sistem de indicator suplimentar pentru a identifica modificările.
Sistem de indicatoare
Această reacție se bazează pe fixarea complementului. Eritrocitele de berbec purificate și serul hemolitic fără complement sunt adăugate în eprubetă la o oră după setarea RSC. Dacă un complement nelegat rămâne în eprubetă, atunci acesta se va alătura complexului AG-AT format între celulele din sângele de oaie și hemolizină și va determina dizolvarea acestora. Aceasta va însemna că RSK este negativ. Dacă eritrocitele au rămas intacte, atunci, în consecință, reacția este pozitivă.
Test de hemaglutinare (RGA)
Există două reacții de hemaglutinare fundamental diferite. Una dintre ele este serologică, este folosită pentru determinarea grupelor sanguine. În acest caz, celulele roșii din sânge interacționează cu anticorpii.
Și al doileareacția nu se aplică serologic, deoarece globulele roșii reacţionează cu hemaglutininele produse de viruși. Deoarece fiecare agent patogen acționează numai asupra unor eritrocite specifice (pui, miel, maimuță), această reacție poate fi considerată foarte specifică.
Puteți spune dacă o reacție este pozitivă sau negativă prin localizarea celulelor sanguine în partea de jos a eprubetei. Dacă modelul lor seamănă cu o umbrelă inversată, atunci virusul dorit este prezent în sângele pacientului. Și dacă toate eritrocitele s-au format ca o coloană de monede, atunci nu există agenți patogeni doriti.
Test de inhibiție a hemaglutinării (HITA)
Aceasta este o reacție foarte specifică care vă permite să determinați tipul, tipul de viruși sau prezența unor anticorpi specifici în serul sanguin al pacientului.
Esența sa constă în faptul că anticorpii adăugați în eprubetă cu materialul de testat împiedică depunerea antigenelor pe eritrocite, oprind astfel hemaglutinarea. Acesta este un semn calitativ al prezenței în sânge a antigenelor specifice pentru virusul specific căutat.
Reacție de imunofluorescență (RIF)
Reacția se bazează pe capacitatea de a detecta complecșii AG-AT cu microscopie fluorescentă după tratamentul lor cu coloranți fluorocromi. Această metodă este ușor de manevrat, nu necesită izolarea culturii pure și durează puțin timp. Este indispensabil pentru diagnosticarea rapidă a bolilor infecțioase.
În practică, aceste reacții serologice sunt împărțite în două tipuri: directe și indirecte.
Direct RIF este produs dinantigen, care este pretratat cu ser fluorescent. Iar cea indirectă este că mai întâi medicamentul este tratat cu un diagnostic convențional care conține antigene pentru anticorpii de interes, iar apoi serul luminescent, care este specific pentru proteinele complexului AG-AT, este reaplicat și celulele microbiene. devin vizibile la microscopie.
