Studiul bacteriilor este de mare importanță practică pentru oameni. Până în prezent, a fost descoperit un număr mare de procariote, care diferă unele de altele în ceea ce privește patogenitatea, aria de distribuție, formă, dimensiune, număr de flageli și alți parametri. Pentru a studia această tulpină în detaliu, se utilizează o metodă de cercetare bacteriologică.
Care sunt metodele de analiză a celulelor bacteriene?
Pentru a determina dacă bacteriile sunt patogene, cultura este examinată în diferite moduri. Printre acestea:
1. Metoda bacterioscopică.
2. Metoda bacteriologică.
3. Metodă biologică.
Metodele de cercetare bacterioscopică și bacteriologică se bazează direct pe lucrul cu celule procariote, atunci când este necesară analiza biologică pentru a studia efectul acestor celule asupra organismului viu al animalelor de experiment. În funcție de gradul de manifestare a anumitor semne ale bolii, omul de știință poate faceconcluzie despre prezența sau absența bacteriilor patogene în probă, precum și propagarea lor în mod natural în corpul animalului pentru a obține cultura și utilizarea lor în alte lucrări.
Metoda bacteriologică de cercetare diferă de cea bacterioscopică. În primul, o cultură special pregătită de procariote vii este utilizată pentru analiză, în timp ce în a doua, se lucrează cu celule moarte sau vii pe o lamă de sticlă.
Etape ale metodei de cercetare bacteriologică. Microbiologie
Principiul studierii proprietăților unei culturi bacteriene poate fi util atât pentru microbiologii care și-au stabilit scopul de a studia celulele procariote, cât și pentru tehnicienii de laborator a căror sarcină este să stabilească patogenitatea sau nepatogenitatea bacteriilor și apoi diagnosticați pacientul.
Metoda de studiere a bacteriilor este împărțită în trei etape:
1. Izolarea bacteriilor din proba originală.
2. Semănarea bacteriilor și creșterea unei culturi pure, studiind proprietățile acesteia.
3. Studiu detaliat al celulelor bacteriene.
Prima etapă
Proba, sau frotiu, este prelevată de pe suprafața liberă a mediului sau de la pacient. Astfel, obținem un „cocktail” din multe tipuri de bacterii care trebuie însămânțate pe un mediu nutritiv. Uneori devine posibilă izolarea imediată a bacteriilor necesare, cunoscând focarele lor de distribuție în organism.
După două sau trei zile, se selectează coloniile dorite șisunt semănate pe medii solide de vase Petri cu ajutorul unei bucle sterile. Multe laboratoare lucrează cu eprubete, care pot conține medii nutritive solide sau lichide. Așa se realizează metoda bacteriologică de cercetare în microbiologie.
A doua etapă
După obținerea coloniilor individuale de bacterii, se efectuează o macro- și microanaliză directă. Se măsoară toți parametrii coloniilor, se determină culoarea și forma fiecăreia dintre ei. Nu este neobișnuit să numărați coloniile pe o placă Petri și apoi în materia primă. Acest lucru este important în analiza bacteriilor patogene, al căror număr depinde de gradul bolii.
Metoda de cercetare bacteriologică, a cărei etapă a 2-a este studierea coloniilor individuale de microorganisme, poate fi asociată cu o metodă biologică de analiză a bacteriilor. Un alt obiectiv al lucrului în această etapă este creșterea cantității de material sursă. Acest lucru se poate face pe un mediu nutritiv sau puteți efectua un experiment in vivo pe organisme experimentale vii. Bacteriile patogene se vor înmulți și, ca rezultat, sângele va conține milioane de celule procariote. Este ușor să pregătiți materialul de lucru necesar al bacteriilor din sângele prelevat.
A treia etapă
Cea mai importantă parte a studiului este determinarea proprietăților morfologice, biochimice, toxigene și antigenice ale culturii bacteriene. Se lucrează cu culturi pre-curățate pe un mediu nutritiv, precum și cu preparate (adesea colorate) la microscop.
Setați calitatea de proprietarbacteriilor patogene sau oportuniste la unul sau altul grup sistematic, precum și pentru a determina rezistența acestora la medicamente, permite metoda bacteriologică de cercetare. Etapa 3 - antibiotice, adică analiza comportamentului celulelor bacteriene în condițiile conținutului de medicamente din mediu.
Studiul rezistenței la antibiotice a unei culturi este de mare importanță practică atunci când este necesar să se prescrie medicamentele necesare și, cel mai important, eficiente pentru un anumit pacient. Aici poate ajuta metoda de cercetare bacteriologică.
Ce este un mediu de creștere?
Pentru dezvoltare și reproducere, bacteriile trebuie să fie în medii nutritive pregătite în prealabil. După consistență, pot fi lichide sau solide, iar după origine - vegetale sau animale.
Cerințe media de bază:
1. Sterilitate.
2. Transparență maximă.
3. Indicatori optimi ai acidității, presiunii osmotice, activității apei și a altor valori biologice.
Obținerea de colonii izolate
1. Metoda Drygalsky. Constă în faptul că pe bucla bacteriană se aplică un frotiu cu diverse tipuri de microorganisme. Această buclă este trecută de-a lungul primei cutii Petri cu un mediu nutritiv. În plus, fără a schimba bucla, metoda materialului rezidual se efectuează pe a doua și a treia cutie Petri. Deci, pe ultimele mostre ale coloniei, bacteriile nu vor fi însămânțate prea dens, simplificând astfel capacitatea de a găsi cele necesare pentru lucru.bacterii.
2. metoda Koch. Utilizează eprubete cu mediu nutritiv topit. Acolo este plasată o buclă sau pipetă cu un frotiu de bacterii, după care conținutul eprubetei este turnat pe o placă specială. Agar (sau gelatina) se solidifică după ceva timp și este ușor să găsiți coloniile de celule dorite în grosimea sa. Este important să diluați amestecul de bacterii în eprubete înainte de a începe lucrul, astfel încât concentrația de microorganisme să nu fie prea mare.
Metoda bacteriologică de cercetare, ale cărei etape se bazează pe izolarea culturii de bacterii dorite, nu se poate lipsi de aceste două metode de găsire a coloniilor izolate.
Antibiogramă
Vizual, reacția bacteriilor la medicamente poate fi văzută în două moduri practice:
1. Metoda discului de hârtie.
2. Reproducere bacterii și antibiotice într-un mediu lichid.
Metoda discului de hârtie necesită o cultură de microorganisme care au fost crescute pe un mediu nutritiv solid. Pe un astfel de mediu se pun cateva bucatele de hartie rotunjita inmuiata cu antibiotice. Dacă medicamentul face față cu succes neutralizării celulelor bacteriene, după un astfel de tratament va exista o zonă lipsită de colonii. Dacă reacția la antibiotic este negativă, bacteria va supraviețui.
În cazul utilizării unui mediu nutritiv lichid, pregătiți mai întâi mai multe eprubete cu o cultură de bacterii de diferite diluții. În aceste eprubete se adaugă antibiotice, iar procesul de interacțiune dintre substanță și microorganisme este observat în timpul zilei. Ca urmare, se obține o antibiogramă de în altă calitate, conform căreia este posibiljudecă eficacitatea medicamentului pentru o anumită cultură.
Principale sarcini de analiză
Aici enumeră obiectivele și etapele metodei bacteriologice de cercetare.
1. Obțineți materialul de pornire care va fi folosit pentru izolarea coloniilor bacteriene. Poate fi un frotiu de pe suprafața oricărui obiect, membrana mucoasă sau cavitatea unui organ uman, un test de sânge.
2. Cultivarea culturii pe un mediu nutritiv solid. După 24-48 de ore, pe placa Petri pot fi găsite colonii de diferite tipuri de bacterii. Selectăm pe cel dorit în funcție de criterii morfologice și/sau biochimice și lucrăm în continuare cu acesta.
3. Propagarea culturii rezultate. Metoda de cercetare bacteriologică se poate baza pe o metodă mecanică sau biologică de creștere a numărului de culturi bacteriene. În primul caz, se lucrează cu medii nutritive solide sau lichide, pe care bacteriile se înmulțesc într-un termostat și formează noi colonii. Metoda biologică necesită condiții naturale pentru creșterea numărului de bacterii, așa că aici animalul de experiment se infectează cu microorganisme. După câteva zile, multe procariote pot fi găsite într-o probă de sânge sau frotiu.
4. Lucrul cu cultura purificată. Pentru a determina poziția sistematică a bacteriilor, precum și apartenența acestora la agenții patogeni, este necesar să se efectueze o analiză amănunțită a celulelor în funcție de caracteristicile morfologice și biochimice. Când se studiază grupurile patogene de microorganisme, este important să se cunoascăcât de eficiente sunt antibioticele.
Aceasta a fost o caracteristică generală a metodei de cercetare bacteriologică.
Caracteristicile analizei
Principala regulă a cercetării bacteriologice este sterilitatea maximă. Dacă lucrați cu eprubete, culturile și subculturile de bacterii trebuie efectuate numai pe o lampă cu spirt încălzită.
Toate etapele metodei de cercetare bacteriologică necesită utilizarea unei bucle speciale sau a unei pipete Pasteur. Ambele unelte trebuie tratate în prealabil în flacăra unei lămpi cu alcool. Cât despre pipeta Pasteur, aici, înainte de sterilizarea termică, este necesar să rupeți vârful pipetei cu o pensetă.
Tehnica de însămânțare a bacteriilor are și ea propriile caracteristici. În primul rând, atunci când se inoculează pe medii solide, o ansă bacteriană este trecută pe suprafața agarului. Bucla, desigur, ar trebui să aibă deja o probă de microorganisme la suprafață. Se practică și inocularea în mediul de cultură, caz în care ansa sau pipeta ar trebui să ajungă la fundul plăcii Petri.
Când lucrați cu medii lichide, se folosesc eprubete. Aici este important să vă asigurați că lichidele nu ating marginile articolelor din sticlă sau dopurilor de laborator, iar instrumentele utilizate (pipetă, buclă) nu ating obiecte și suprafețe străine.
Importanța metodei de cercetare biologică
Analiza probelor de bacterii are aplicațiile sale practice. în primul rândMetoda de cercetare bacteriologică poate fi utilizată în medicină. De exemplu, este necesar să se studieze microflora pacientului pentru a stabili diagnosticul corect, precum și pentru a dezvolta cursul corect de tratament. O antibiogramă ajută aici, care va arăta activitatea medicamentelor împotriva agentului patogen.
Analiza bacteriilor este folosită în laborator pentru a detecta boli periculoase precum tuberculoza, febra recidivante sau gonoreea. De asemenea, este folosit pentru a studia compoziția bacteriană a amigdalelor și a cavităților organelor.
Metoda de cercetare bacteriologică poate fi folosită pentru a determina contaminarea mediului. Conform datelor privind compoziția cantitativă și calitativă a unui frotiu de pe suprafața unui obiect, se determină gradul de populare a acestui mediu de către microorganisme.
