Recent, a fost dezvoltată o metodă de încredere, foarte sensibilă și rapidă pentru diagnosticarea diferitelor boli infecțioase umane. Această metodă se numește „analiza PCR”. Ce este, care este esența sa, ce microorganisme poate dezvălui și cum să o luăm corect, vom spune în articolul nostru.
Istoricul descoperirilor
A inventat metoda reacției în lanț a polimerazei (PCR) de către omul de știință american Kary Mullis în 1983. Inițial, metoda de diagnostic a fost brevetată de Cetus Corporation, în care a lucrat creatorul acesteia. Dar în 1992, toate drepturile și brevetele au fost vândute către Hoffman-La Roche. După aceea, s-a dovedit că studii similare au fost efectuate în paralel și au fost înregistrate de alți biologi americani, precum Alice Chen, David Edgar, John Trell. În 1980, oamenii de știință sovietici A. Slyusarenko, A. Kaledin și S. Gorodetsky s-au ocupat și ei de această problemă. Prin urmare, a fost imposibil să se determine singurul deținător al drepturilor de autor. Mulți biochimiști proeminenți au adus o anumită contribuție la dezvoltarea tehnicii reacției în lanț a polimerazei și și-au brevetat inovațiile. În prezent, analizaPCR se efectuează peste tot în laboratoare special echipate.
Esența metodei de diagnosticare PCR
Analiza PCR: ce este și cum funcționează? Esența metodei este creșterea volumului unui anumit mediu microbian în condiții artificiale folosind o enzimă specială ADN polimerază. Pentru aceasta, materialul ADN existent este multiplicat de multe ori. Astfel, în prezența unui microorganism patogen în probă, cantitatea acestuia va fi crescută datorită manipulărilor biochimice de laborator și nu va fi dificil să detectezi bacteria la microscop.
Cum se face cercetarea materialului?
Necesar pentru analiză:
- matrice ADN;
- amorse care conectează capetele unei bucăți de material;
- enzima ADN polimerază rezistentă la căldură;
- produse chimice care fac ca enzimele să funcționeze corect;
- soluție tampon necesară pentru a crea condițiile adecvate pentru creșterea și dezvoltarea materialului ADN.
Pentru a efectua PCR se efectuează 25-30 de repetări, formate din trei etape: denaturare, recoacere și alungire.
Pentru analiza reacției polimerului în lanț, se folosește un dispozitiv special - un amplificator. Echipamentele moderne vă permit să setați programul necesar pentru tuburile de încălzire și răcire pentru a elimina erorile din timpul diagnosticării.
Unde se utilizează diagnosticul?
Metoda reacției polimerice în lanț este utilizată în diverse domenii ale medicinei:
- criminaliști cuidentifică materialul genetic, cum ar fi părul, saliva sau sângele;
- Testul de sânge PCR ajută la genotipare, de exemplu, pentru a detecta o reacție individuală inerentă genetic la un anumit medicament;
- folosind această metodă pentru a stabili prezența legăturilor de familie între oameni;
- Cea mai populară metodă PCR a devenit în diagnosticul medical pentru a determina diferite boli infecțioase.
Ce infecții detectează PCR?
Deci, medicina a folosit de mult și cu succes analiza PCR. Ce este, știm deja. Și ce agenți patogeni pot fi detectați cu el? Următoarele boli infecțioase sunt diagnosticate prin metoda PCR:
- hepatita A, B, C;
- ureaplasmoza;
- candidoză;
- chlamydia;
- micoplasmoză;
- gardeloză;
- mononucleoză infecțioasă;
- tricomonioză;
- infecție cu papilomavirus;
- tuberculoză;
- infecții cu herpes tipurile 1 și 2;
- helicobacterioză;
- citomegalovirus;
- difterie;
- salmoneloză;
- Infecție cu HIV.
De asemenea, metodele PCR sunt folosite în diagnosticarea cancerului.
Beneficiile metodei
Diagnoza PCR are mai multe avantaje:
- Sensibilitate ridicată. Chiar și în prezența doar a câtorva molecule de ADN al microorganismului, analiza PCR determină prezența infecției. Metoda va ajuta cu bolile cronice și latente. Adesea, în astfel de cazuri, microorganismuleste altfel de necultivat.
- Orice material este potrivit pentru cercetare, cum ar fi saliva, sângele, secrețiile genitale, părul, celulele epiteliale. Cea mai frecventă este analiza sângelui și a frotiului urogenital pentru PCR.
- Nu este necesară decuparea pe termen lung. Procesul de diagnosticare automată vă permite să obțineți rezultatele studiului după 4-5 ore.
- Metoda este aproape 100% fiabilă. Au fost înregistrate doar cazuri izolate de rezultate fals negative.
- Abilitatea de a identifica mai multe tipuri de agenți patogeni dintr-o singură probă de material. Acest lucru nu numai că accelerează procesul de diagnosticare a bolii, dar și reduce semnificativ costurile materiale. Adesea, medicul prescrie o analiză PCR cuprinzătoare. Prețul examinării, care constă în determinarea a șase agenți patogeni, este de aproximativ 1.500 de ruble.
Recomandări pentru pregătirea analizei
Pentru ca rezultatele să fie de încredere în timpul studiului PCR, trebuie să faceți testul, urmând recomandările pentru pregătirea preliminară pentru diagnostic:
- Înainte de a dona salivă, ar trebui să vă abțineți de la a mânca și a lua medicamente cu 4 ore înainte de prelevare. Imediat înainte de procedură, clătiți-vă gura cu apă fiartă.
- Regulile de mai sus trebuie respectate și atunci când se prelevează o probă de pe suprafața interioară a obrazului. După clătire, se recomandă efectuarea unui masaj ușor al pielii pentru a evidenția secreția glandei.
- Urina este de obicei colectată acasă. Pentru a face acest lucru, trebuie să efectuați o toaletă amănunțităorganele genitale. Colectați 50-60 ml de urină într-un recipient steril din plastic. Pentru a asigura puritatea materialului, se recomandă femeilor să introducă un tampon în vagin, iar bărbaților să tragă cât mai mult în spate pliul pielii. Nu donați în timpul menstruației.
- Pentru a dona spermă, trebuie să vă abțineți de la actul sexual timp de 3 zile înainte de prelevare. De asemenea, medicii sfătuiesc să nu viziteze saună și să faci o baie fierbinte, să bei alcool și alimente picante. Trebuie să vă abțineți să urinați cu 3 ore înainte de test.
- Pentru a face un frotiu urogenital, de exemplu, dacă se efectuează un test PCR pentru chlamydia, atât femeilor, cât și bărbaților li se recomandă să se odihnească sexual timp de 3 zile. Medicamentele antibacteriene nu trebuie luate cu 2 săptămâni înainte de analiză. Timp de o săptămână, trebuie să încetați să utilizați geluri intime, unguente, supozitoare vaginale, dușuri. Cu 3 ore înainte de examinare, trebuie să vă abțineți de la urinare. În timpul menstruației, prelevarea de probe nu se efectuează, la numai 3 zile după încetarea scurgerii de sânge, puteți face un frotiu urogenital.
PCR în timpul sarcinii
În perioada de așteptare a bebelușului, multe infecții cu transmitere sexuală sunt extrem de periculoase pentru dezvoltarea normală a fătului. BTS pot provoca întârzierea creșterii intrauterine, avortul spontan sau nașterea prematură, malformații congenitale ale copilului. Prin urmare, este extrem de important să faceți o examinare PCR la începutul sarcinii. Este necesar să treceți analiza la înregistrare - până la 12 săptămâni.
Materialul este prelevat din canalul cervical cu o perie specială. Procedura este nedureroasă și nu reprezintă un pericol pentru copil. De obicei, în timpul sarcinii, se efectuează o analiză pentru chlamydia prin metoda PCR, precum și pentru ureaplasmoză, micoplasmoză, citomegalovirus, herpes, papilomavirus. Un astfel de complex de examinări se numește PCR-6.
PCR pentru diagnosticul HIV
Datorită faptului că metoda reacției în lanț a polimerazei este foarte sensibilă la modificările din organism și la condițiile diagnosticului, mulți factori pot afecta rezultatul. Prin urmare, analiza PCR pentru infecția cu HIV nu este o metodă de încredere, eficiența sa este de 96–98%. În restul de 2-4% din cazuri, testul dă rezultate fals pozitive.
Dar în unele situații, diagnosticarea HIV PCR este indispensabilă. De obicei, se administrează persoanelor cu un rezultat ELISA fals negativ. Astfel de indicatori indică faptul că o persoană nu a dezvoltat încă anticorpi împotriva virusului și nu pot fi detectați fără o creștere multiplă a numărului. Acesta este exact ceea ce se poate realiza prin efectuarea unui test de sânge PCR.
Aceste diagnostice sunt necesare și pentru copiii din primul an de viață născuți dintr-o mamă seropozitivă. Metoda este singura modalitate de a determina în mod fiabil statutul unui copil.
PCR pentru diagnosticarea hepatitei
Metoda reacției în lanț a polimerazei permite detectarea ADN-ului virusului hepatitei A, B, C cu mult înainte de formarea anticorpilor împotriva infecției sau de apariția simptomelor bolii. Analiza PCR pentru hepatita C este deosebit de eficientă, deoarece în 85% din cazuri această boală este asimptomatică și fărătratamentul în timp util intră în stadiul cronic.
Depistarea în timp util a agentului patogen va ajuta la evitarea complicațiilor și a tratamentului pe termen lung.
Examinare PCR cuprinzătoare
Analiza PCR complexă: ce este? Aceasta este o examinare folosind metoda reacției polimerice în lanț, care include determinarea mai multor tipuri de infecții simultan: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, citomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes tipurile 1 și 2, papiloreea. Prețul unei astfel de diagnostice variază de la 2000 la 3500 de ruble. in functie de clinica, materialele si echipamentele folosite, precum si de tipul de analiza: calitativa sau cantitativa. Ce este necesar în cazul dvs. - medicul va decide. În unele cazuri, este suficient doar să se determine prezența agentului patogen, în altele, de exemplu, cu infecția cu HIV, un titru cantitativ joacă un rol important. La diagnosticarea tuturor agenților patogeni de mai sus, examinarea se numește „analiza PCR-12”.
Transcrierea rezultatelor analizei
Descifrarea analizei PCR nu este dificilă. Există doar 2 scale ale indicatorului - „rezultat pozitiv” și „rezultat negativ”. Când este detectat un agent patogen, medicii pot confirma prezența bolii cu o certitudine de 99% și pot începe să trateze pacientul. Cu o metodă cantitativă pentru determinarea infecției, coloana corespunzătoare va indica indicatorul numeric al bacteriilor detectate. Numai un medic poate determina amploarea bolii și poate prescrie tratamentul necesar.
În unele cazuri, de exemplu, la determinarea infecției cu HIV prin PCR, cu un rezultat negativ, devine necesară efectuarea unor examinări suplimentare pentru a confirma indicatorii obținuți.
Unde să fii testat?
Unde să faci un test PCR: într-o clinică publică sau într-un laborator privat? Din păcate, în instituțiile medicale municipale, echipamentele și metodele sunt adesea depășite. Prin urmare, este mai bine să acordați preferință laboratoarelor private cu echipamente moderne și personal în alt calificat. În plus, într-o clinică privată, veți obține rezultate mult mai rapid.
La Moscova, multe laboratoare private oferă analize PCR pentru diferite infecții. De exemplu, în astfel de clinici precum Vita, Clinica Complex, Happy Family, Uro-Pro, se efectuează analiza PCR. Prețul examenului este de la 200 de ruble. pentru identificarea unui agent patogen.
Se poate concluziona că diagnosticarea bolilor infecțioase prin PCR este în majoritatea cazurilor o modalitate rapidă și fiabilă de a detecta agentul patogen din organism în stadiile incipiente ale infecției. Dar totuși, în anumite cazuri, merită să alegeți alte metode de diagnosticare. Doar un specialist poate determina necesitatea unui astfel de studiu. Descifrarea analizei PCR necesită și o abordare profesională. Urmați sfatul medicului dumneavoastră și nu faceți analize de care nu aveți nevoie.
